Микроклонирование растений — высокоточный процесс, требующий строгого соблюдения стерильных условий. Даже незначительное загрязнение бактериями, грибами или вирусами может погубить всю культуру. В этой статье разберём ключевые правила поддержания стерильности в лаборатории и способы минимизации рисков заражения.

Ламинарный бокс — основа стерильностиЛаминарный шкаф с вертикальным или горизонтальным потоком воздуха создаёт зону, защищённую от внешних загрязнений. Перед работой необходимо:

• Протереть поверхности бокса 70% этанолом или изопропанолом.
  
• Включить УФ-лампу на 15–30 минут для обеззараживания.
  
• Проверить целостность HEPA-фильтра (менять по мере загрязнения).
  

Обработка инструментов

• Автоклавирование (121°C, 1–1,5 атм, 20–30 мин) — основной метод стерилизации инструментов, посуды и питательных сред.
  
• Сухожар (160–180°C, 2 часа) — подходит для металлических инструментов.
  
• Химическая стерилизация (перекись водорода, хлоргексидин) — для обработки поверхностей и эксплантов.

1. Механическая промывка — удаление грязи под проточной водой.
   
2. Предстерилизация — замачивание в мыльном растворе или детергенте.
   
3. Обеззараживание — обработка:
   
   • Этанолом (70%) — 30–60 сек.
     
   • Гипохлоритом натрия (5–10%) — 5–15 мин.
     
   • Перекисью водорода (3–5%) — 5–10 мин.
     
4. Промывка стерильной водой — 3–5 раз для удаления остатков химикатов.

Признаки заражения

• Бактерии → мутная слизь на среде.
  
• Грибы → пушистый налёт (белый, серый, чёрный).
  
• Дрожжи → вязкие колонии.
  

Как предотвратить загрязнение?✔ Регулярная дезинфекция поверхностей, рук и оборудования.
✔ Использование одноразовых перчаток и масок (человеческая микрофлора — частый источник заражения).
✔ Минимизация контакта с открытым воздухом — быстрая работа в ламинарном боксе.
✔ Добавление антибиотиков/фунгицидов (например, гентомицин, нистатин) в среду при работе с сложными эксплантами.

• Изолировать заражённые пробирки сразу после обнаружения.
  
• Проверить стерильность сред (автоклавирование, условия хранения).
  
• Анализировать источник (недостаточная стерилизация эксплантов, грязный инструмент, нарушения в работе ламинарного бокса).
  

ЗаключениеСтерильность — ключевой фактор успеха в микроклонировании. Соблюдение протоколов, аккуратность и регулярный контроль помогут избежать потерь культур и повысить эффективность работы лаборатории.
Дополнительные советы:

• Ведите журнал стерилизации и наблюдений за культурами.
  
• Проводите обучение персонала правилам асептики.
  
• Используйте качественные реактивы и оборудование.